葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓致痛因子表达的影响

摘要：目的：探讨葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓中致痛因子依赖于钙离子的钾离子通道蛋白（IK1）、降钙素基因相关肽（CGRP）、环氧合酶2（COX-2）、嘌呤能受体（P2X3）相对表达量的影响，研究葡萄糖酸钙在疼痛中的作用。方法将雄性 SD 大鼠80只随机分为福尔马林、10、40、100、300μL／kg 毒液致痛组（40只）和钙剂治疗组（40只），其中治疗组大鼠预先尾部静脉注射10％葡萄糖酸钙2 mL，然后两组大鼠均以5％福尔马林溶液150μL 和4种剂量（10、40、100、300μL／kg）的间斑寇蛛毒液进行足底皮下注射，24 h 后处死后，取 L4～5脊髓标本，采用免疫组化、Western blot 和荧光实时定量 PCR 技术分别从组织学、蛋白以及分子水平分析两组 P2X3、CGRP、COX-2和 IK1相对表达量。结果（1）免疫组化结果显示300μL／kg 毒液剂量时，治疗组 P2X3和 CGRP的表达显著低于致痛组，差异具有统计学意义（P ＜0．05），COX-2和 IK1的表达差异无统计学意义（P ＞0．05）。（2）Western blotting 结果显示，与致痛组各剂量相比，10μL／kg 剂量治疗组大鼠脊髓中 P2X3和 IK1表达量明显升高，CGRP 和 COX-2表达量降低，差异有统计学意义（P ＜0．05）；40μL／kg 剂量治疗组 COX-2表达量降低， CGRP、P2X3和 IK1的表达差异无统计学意义（P ＞0．05）；100μL／kg 剂量治疗组 P2X3、CGRP 和 IK1表达量明显降低，COX-2的表达量升高，差异具有统计学意义（P ＜0．05）；300μL／kg 剂量治疗组大鼠脊髓中 P2X3、CGRP、COX-2、IK1表达量明显降低，差异具有统计学意义（P ＜0．05）。（3）荧光实时定量 PCR 结果显示：10μL／kg 治疗组大鼠脊髓中 P2X3和 CGRP mRNA 的表达高于致痛组，COX-2和 IK1 mRNA 的表达低于致痛组，差异有统计学意义（P ＜0．05）；40μL／kg 治疗组 P2X3和 IK1 mRNA 的表达高于致痛组，CGRP mRNA 的表达低于致痛组，差异有统计学意义（P ＜0．05），COX-2 mRNA 的 表 达 差 异 无 统 计 学 意义（P ＞0．05）；100μL／kg 治疗组 P2X3、CGRP、和 COX-2 mRNA 的表达均高于致痛组，IK1 mRNA 的表达低于致痛组，差异有统计学意义（P ＜0．05）；300μL／kg 治疗组 P2X3、CGRP、COX-2和 IK1 mRNA 的表达均高于致痛组，差异具有统计学意义（P ＜0．05）。各致痛组间 P2X3、CGRP、COX-2和 IK1 mRNA 表达差异无统计学意义（P ＞0．05）。（4）3种方法结果显示福尔马林致痛组与治疗组致痛因子的表达差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论新疆间斑寇蛛毒的致痛机制可能与大鼠脊髓中致痛因子 CGRP、P2X3、COX-2和 IK1蛋白的高表达有关，葡萄糖酸钙能显著抑制部分高浓度毒素组致痛因子 CGRP、P2X3、COX-2和 IK1蛋白的表达量，缓解疼痛的传递。